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流式细胞仪操作指南及注意事项

作者: 发布时间:2023-03-16 浏览次数:

1、上样必须使用12*75mm的流式管,以免将吸样针戳弯。

上机前样本用大于200目筛(尼龙网或过滤器)过滤细胞,制成单细胞悬液,避免细胞黏连、沉积,堵塞管道。

上样细胞大小为0.2-40μm;

细胞数量为2×105-2×106个/mL;

体积不少于300μL,不高于流式管的2/3。

禁止使用含有吖啶橙染料的样本上机。

2、开机步骤:打开电脑—点开软件CytExpert—(中间的弹框或菜单栏)新建实验—设置保存路径(E盘数据盘,主文件夹以课题组老师命名,次级文件夹是个人名字,名字全称命名)—点菜单栏细胞仪—开机—开机流程—初始化—放置2mL去离子水/超纯水(自备)--开始(10min)。

上样操作步骤:点菜单栏设置—设置通道、标签—去掉不需要的通道,留下需要的通道—应用到—关闭—在工作区快捷工作栏点散点图或直方图—更改图形X、Y轴的标签—在功能区给所有试管编号,选中第一个试管编号—初始化—放样本管—运行—设门、调增益(电压)、调补偿(后期也可调)、设阈值、设置P1、P2区等—记录—下一个试管—运行(根据情况决定是否调参数)—记录。

关机步骤:点菜单栏细胞仪—每日清洗—放置蓝色清洗液5min—放置去离子水5min—点菜单栏细胞仪—关机—关闭电脑(流式细胞仪仪器的前后两开关不用关)。

PI染料、细菌、真菌每日清洗使用蓝色清洗液延长至15min。

3、使用前两检一察:检查鞘液(2/3以下为鞘液不足,自行添加并记录于仪器运行记录本)和废液情况(废液超过1/2请按要求处理),注意观察进样针头情况(是否弯曲,勿用手触摸针头)。

进样开始:注意观察针头是否触碰到流式管底部,不能触碰管底。如上错样也不要拿取流式管进行调换,让它继续。不要在进样过程中触碰置管架和流式管。

使用结束:登记仪器运行情况,保持桌面整洁,拷贝数据请自带光盘,不得使用U盘严防电脑病毒感染,保证电脑系统的正常运行。数据存储以课题组为单位建文件夹,文件夹和子文件夹命名请用实验人员的中文名字,并且每次使用时把上一次的数据删除,以保障电脑内存。

4、仪器使用需至少提前一天在贵州医科大学大型仪器共享管理平台(http://dygx.gmc.edu.cn/)上预约,预约时间为整点对整点,1个小时为基本预约单位。每次预约不超过2小时,如超过2小时请提前向仪器负责人说明情况,酌情考虑是否增加使用时间。

5、预约使用仪器的同学预约成功后,应根据预约时间准时到达实验室使用仪器,仪器使用记录时长以预约时长为准。若同学迟到,责任自担。预约人如果不能如期使用仪器,请提前2小时在大型仪器共享管理平台上取消,同时在本中心大型仪器预约QQ群(778648075)内告知。若未按规定取消,在仪器使用记录上记录1小时。

6、预约使用权限仅限本人使用,不得转让,不得随意带其他人员进入(如有见习人员请提前报备)。平台会不定期核对预约人与使用人信息,如发现信息不符或存在其他违规行为,将依照《转化医学研究中心仪器管理办法(试行)》中相关规定进行处罚。